Dados do Trabalho

Título

POTENCIAIS GENES RELACIONADOS A DESENVOLVIMENTO DE PLANTAS EM SOLOS SUSCETIVEIS A SECA

Resumo

A busca pela melhor gestão hídrica está incluída nos objetivos de desenvolvimento sustentáveis (ODS) da ONU, neles, o setor agrícola tem o desafio de aumentar a produção de alimentos para a população frente a redução da água disponível para os cultivos. A partir disso, surge a necessidade da obtenção de culturas que possuam melhor eficiência no uso de água e resistam ao estresse por seca com menor unidade de água consumida. O objetivo desse trabalho foi, através da tecnologia CRISPR/Cas9, nocautear genes com potencial de conferir tolerância a estresse hídrico em plantas de arroz, assim como, mediante promotor da ubiquitina do milho, superexpressá-los, ambas abordagens para posterior caracterização funcional de genes ainda não caracterizadas. Essa pesquisa selecionou dois genes em um RNA-seq realizado por Ferreira (2017), em seguida, para o nocaute, o sgRNA de cada gene foi desenhado na plataforma CRISPR-PLANT, e após essa etapa os sgRNA foram inseridos no vetor pRGEB31 mediante restrição da enzima Bsa1 e ligação com T4 DNA ligase. Após isso, obteve-se as construções DUF-gRNAF e EF2-gRNAF. Para a superexpressão utilizou-se o vetor IRS154 e, através de PCR, a região codificante dos genes foi amplificada em uma primeira reação, a qual se repetiu para que se colocasse as sequências correspondentes aos sítios de restrição das enzimas BamHI e KPNI e fosse realizada a clonagem através de reação de restrição por essas enzimas e respectiva ligação com T4 DNA. 4 Construções foram obtidas e confirmadas através do sequenciamento Sanger: pRGEB31-gRNA-UP, pRGEB31-gRNA-EF, pIRS-154-UP e pIRS-154-EF. Após isso, foi realizada a transformação de plantas de arroz mediante Agrobacterium tumefancies, etapa essencial para que, posteriormente, seja feita caracterização funcional dos genes potencialmente relacionados à seca. As abordagens foram eficientes para obtenção de linhagens de plantas necessárias para caracterização funcional dos genes potencialmente relacionados com a seca.

Palavras-chave

Estresse Abiótico, Água disponível, Biotecnologia de plantas

Instituição financiadora

FAPERJ, CAPES

Agradecimentos

Ao Laboratório de Nutrição Mineral de Plantas pela oportunidade de trabalho e apoio na elaboração da pesquisa.